Ферменты в синтезе нуклеотидов, меченных радиоактивным фосфором.

В работе собраны материалы по синтезу нуклеотидов, меченных радиоактивноми изотопами фосфора, высокой молярной активности с помощью ферментов . Наиболее подробно описаны способы получения природных предшественников биосинтеза нуклеиновых кислот - нуклеозид-5'-трифосфатов, меченных радиоактивным фосфором в различные положения для исследований в области молекулярной биологии и генетики. Приведены конкретные методики ферментативного синтеза [?-32(33)P]ATP, [?-32(33)P]NTP и [?-32(33)P]dNTP для лабораторного и полупромышленного масштаба. Обсуждаются различные методы очистки целевых соединений и приведены конкретные условия хроматографической очистки меченых (d)NTP с помощью обратно-фазовой ВЭЖХ. Подробно обсуждаются критерии качества меченых фосфором-32 и фосфором-33 нуклеотидов, с учетом требований исследователей биологов, использующих эти соединения в работе. Приведены примеры получения синтетических аналогов нуклеотидов, в том числе терминаторов биосинтеза нуклеиновых кислот, меченных радиоактивным фосфором. Представлена реализованная технологическая схема крупномасштабного производства меченых нуклеотидов.